作為色譜工作者，開發(fā)方法是不可避免的。即使有國(guó)標(biāo)或行標(biāo)，也需要在實(shí)驗(yàn)室里從頭到尾演練一遍，不可能原封不動(dòng)地套用原有的公式。隨著儀器的高、精、尖趨勢(shì)發(fā)展，國(guó)標(biāo)或行標(biāo)會(huì)正逐漸顯得太過(guò)于繁瑣和落后。但你也可以拋開國(guó)標(biāo)，針對(duì)自己實(shí)驗(yàn)室的現(xiàn)有儀器裝備，開發(fā)出一套別出心裁、簡(jiǎn)便快捷的方法。 開發(fā)方法，不可避免地要對(duì)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。如何評(píng)價(jià)呢？主要有兩方面：一是實(shí)用性，看看你這方法是否實(shí)用，是否能夠推廣，如果你只想在自己的實(shí)驗(yàn)室用一用，也可不必考慮這一方面；二是可靠性，評(píng)價(jià)可靠性的主要指標(biāo)有檢測(cè)限、線性范圍、回收率、重復(fù)性與重現(xiàn)性等等。可靠性是必須評(píng)價(jià)的。 重復(fù)性與重現(xiàn)性的區(qū)別與？ 重復(fù)性（repeatability）與重現(xiàn)性（再現(xiàn)性，reproducibility），二者都是用來(lái)評(píng)價(jià)分析結(jié)果的精密度。大多數(shù)人都不作嚴(yán)格區(qū)分，有的文獻(xiàn)中還常常混用。但是二者的實(shí)際意義是不一樣的。 重復(fù)性：是指同一分析人員在同一條件下所得分析結(jié)果的精密度，重現(xiàn)性：是指不同分析人員或不同實(shí)驗(yàn)室在各自的條件下所得分析結(jié)果的精密度。也就是說(shuō)，重現(xiàn)性比重復(fù)性提出了更高的要求。重復(fù)性好，重現(xiàn)性未必好。而重現(xiàn)性好，重復(fù)性肯定好。二者都是用多次分析結(jié)果的RSD來(lái)表示。 對(duì)現(xiàn)代儀器分析而言，重復(fù)性是容易實(shí)現(xiàn)的，而重現(xiàn)性是更重要的，也是方法驗(yàn)證必須考察的。 方法的重現(xiàn)性包括連續(xù)多次進(jìn)樣分析的重復(fù)性、不同天數(shù)間的重復(fù)性、不同型號(hào)儀器間的重現(xiàn)性和不同實(shí)驗(yàn)室間的重現(xiàn)性。 何時(shí)必須進(jìn)行重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)？ 當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，應(yīng)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。例如，建立獸藥典分析方法時(shí)應(yīng)通過(guò)不同實(shí)驗(yàn)室的復(fù)核檢驗(yàn)得出重現(xiàn)性結(jié)果，復(fù)核檢驗(yàn)的目的、過(guò)程、重現(xiàn)性結(jié)果均應(yīng)記載在起草說(shuō)明中。應(yīng)注意重現(xiàn)性試驗(yàn)用的樣品本身的質(zhì)量均勻性和貯存運(yùn)輸中的環(huán)境影響因素，以免影響重現(xiàn)性結(jié)果。 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的先后順序？方法開發(fā)人員，首先應(yīng)測(cè)定重復(fù)性。即在相同條件下連續(xù)進(jìn)樣5－10次，一般要求保留時(shí)間的RSD不大于1%，峰面積的RSD不大于5%。 如果樣品要經(jīng)過(guò)預(yù)處理，還應(yīng)測(cè)同一樣品多次處理的重復(fù)性。即同一樣品取3－5份作平行處理，測(cè)定結(jié)果的RSD不應(yīng)大于5%。某些工業(yè)分析要求不大于10%。至于天與天之間的重復(fù)性也不應(yīng)大于10%。當(dāng)上述重復(fù)性滿足要求后，說(shuō)明該方法在你的實(shí)驗(yàn)室是可靠的。 要將此方法推廣使用，還必須測(cè)定不同儀器、不同分析人員、不同實(shí)驗(yàn)室之間的重現(xiàn)性。當(dāng)這些重現(xiàn)性都能滿足要求時(shí)，這一方法的的可靠性就得到較為滿意的驗(yàn)證。 重現(xiàn)性不好，怎么找原因？ HPLC分析時(shí)保留時(shí)間重現(xiàn)性不穩(wěn)定可能的原因？HPLC分析時(shí)，保留時(shí)間重現(xiàn)性不穩(wěn)定會(huì)影響峰面積的重現(xiàn)性，從而造成實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不，色譜分析無(wú)法進(jìn)行，造成這方面的原因有很多，常見的解決方案與排查方法如下： 確認(rèn)色譜柱是好的； 確認(rèn)流動(dòng)相是新鮮配置的，比例沒(méi)有錯(cuò)誤； 檢查一下溶劑瓶里的溶劑過(guò)濾器沒(méi)有長(zhǎng)菌，沒(méi)有被堵塞； 如果使用梯度洗脫方法，請(qǐng)確認(rèn)平衡時(shí)間足夠長(zhǎng)； 如果是壓力不穩(wěn)定，一定會(huì)影響保留時(shí)間； 仔細(xì)觀察柱前壓的變化，如果壓力穩(wěn)定，就可以判斷泵的系統(tǒng)沒(méi)有問(wèn)題，請(qǐng)更換新的色譜柱試試。GC重現(xiàn)性不好，可能原因是？定量不重復(fù)的原因有很多，一般是兩大類：一類是單純性的靈敏度變化型，即除了定量重復(fù)性不合格外，其它指標(biāo)未發(fā)現(xiàn)異常；另一類為伴隨性靈敏度變化型，即除靈敏度變化之外還伴隨著其它異?，F(xiàn)象出現(xiàn)，包括基線不穩(wěn)定性、峰保留時(shí)間變化及產(chǎn)生峰形畸變等異?，F(xiàn)象。屬于*類型故障的原因主要是：進(jìn)樣技術(shù)不佳、注射器有堵漏，樣品制備不均勻、進(jìn)樣口污染物堆積以及氣路存在漏氣現(xiàn)象等；屬于第二類型故障的原因主要是：載氣流量變化，檢測(cè)器玷污、過(guò)載，柱溫變化以及檢測(cè)器操作條件（如氫氣、極化電壓、脈沖電壓等）發(fā)生變化。 檢測(cè)方案如下：(1)進(jìn)樣技術(shù)檢查，進(jìn)樣技術(shù)不佳是造成色譜峰不重復(fù)的zui可能原因。它通常表現(xiàn)為峰高、峰面積忽大忽小，峰高、峰面積大小變化無(wú)規(guī)則。提高進(jìn)樣重復(fù)性的關(guān)鍵，在于始終保持進(jìn)樣操作個(gè)大步驟的重復(fù)性，這包括取樣操作，取樣到進(jìn)樣期間的空閑時(shí)間，進(jìn)針快慢及拔出注射器的早晚，通常操作人員在經(jīng)過(guò)較多地進(jìn)樣重復(fù)性訓(xùn)練之后，可以達(dá)到所需的要求。 (2)注射器的檢查，操作人員進(jìn)樣技術(shù)提高后，色譜峰靈敏度仍然無(wú)顯著改觀，需認(rèn)真檢查注射器本身是否有堵塞或泄露現(xiàn)象，必要時(shí)更換一個(gè)好的注射器重新進(jìn)樣實(shí)驗(yàn)。一旦出現(xiàn)樣品峰面積重現(xiàn)性不好怎么辦？ 1.我們首先應(yīng)該從簡(jiǎn)單的基本的入手，先不要去輕易的懷疑儀器有故障，排除一些由于自身的低級(jí)錯(cuò)誤而造成該問(wèn)題的可能性（譬如樣品自身的問(wèn)題，標(biāo)樣的濃度是否因配置不準(zhǔn)確或者揮發(fā)等原因造成改變，或者因?yàn)樯V條件的改變而造成的，如分流比前后不一致等）。 2.然后下一步要做的就是檢查儀器的一些情況了，具體的包括： 進(jìn)樣口部分：更換進(jìn)樣墊，防止因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間不更換墊本身被針扎松了造成漏氣；檢查玻璃襯管，更換石英棉；檢查石英棉的位置是否合適，清洗玻璃襯管，必要時(shí)更換玻璃襯管上的石墨密封圈(也可能是橡膠的)。取出襯管后用吸耳球吹掃進(jìn)樣口內(nèi)部，必要時(shí)用棉棒蘸丙酮擦拭。用皂膜流量計(jì)測(cè)量清洗氣出口(PURGE)及分流出口(SPL)的流量是否合適。緊固各連接部件，如進(jìn)樣口上部的緊固螺栓，清洗氣及分流管路中的分子篩，過(guò)濾器，緩沖管，各連接處是否松動(dòng)。 色譜柱部分：首先應(yīng)確認(rèn)色譜柱處于良好的工作狀態(tài)，譬如老化是否充分，檢查柱與進(jìn)樣口及檢測(cè)器兩端的插入長(zhǎng)度是否符合要求，柱頭處端面是否整齊，必要時(shí)切掉幾公分。檢查柱兩端的石墨墊密封情況是否良好，必要時(shí)更換之。 檢測(cè)器部分：取下收集極，拆下噴嘴檢查是否有堵塞情況，必要時(shí)進(jìn)行疏通。檢查氫氣和空氣的管路是否通暢。觀察收集極表面是否有生銹或者積炭的情況，進(jìn)行清潔處理。進(jìn)行完上述簡(jiǎn)單處理后開機(jī)用標(biāo)樣進(jìn)行試驗(yàn)，不進(jìn)樣品，空走一遍做一針空白，保留譜圖。單進(jìn)一針用于溶解樣品的溶劑，保留譜圖。 很多實(shí)驗(yàn)室分析人員在面對(duì)度、重現(xiàn)性、重復(fù)性這些定義的時(shí)候都會(huì)犯迷糊，到底重復(fù)性與重現(xiàn)性的區(qū)別與？重復(fù)性實(shí)驗(yàn)和重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)的先后順序？重現(xiàn)性不好，怎么找原因？。。。等等這些問(wèn)題，今天以后就沒(méi)理由再傻傻分不清楚了吧